Лаборатория располагает обширной коллекцией вирусов, относящихся к разным группам по классификации Балтимора. Коллекция лаборатории включает следующие вирусы:
- вирусы гриппа А человека и птиц (H1N1, H2N2, H3N2, H5N2, H5N3, H1N1pdm09, H7N9, H5N8 и др.),
- вирусы гриппа B викторианской и ямагатской линий,
- аденовирус человека 5 типа,
- аденовирусы птиц Fontes и CeLo,
- респираторно- синцитиальный вирус,
- вирус парагриппа,
- вирусы простого герпеса 1 и 2 типа,
- цитомегаловирус человека,
- ротавирус человека,
- вирусы Коксаки A16, B3 (штамм Nancy), B4, B5, A21,
- энтеровирус А71,
- вирус ECHO 3, 30,
- риновирус человека типа В14,
- вирус везикулярного стоматита, штамм Indiana,
- вирус кори,
- вирус краснухи,
- вирус паротита,
- коронавирусы человека (OC43, SARS-CoV-2),
- вирус гепатита мышей (коронавирус MHV).
Коллекция вирусных штаммов периодически пополняется эпидемиологически актуальными изолятами. Хранение коллекции вирусов осуществляется в низкотемпературном холодильнике с соблюдением требований санитарных правил. Наращивание вирусов выполняется с использованием соответствующих пермиссивных клеточных культур в одноразовых стерильных пластиковых культуральных флаконах в асептических условиях. Для определения титра вирусов в лаборатории используются как классические методы вирусологии, так и современные молекулярно-биологические методы. К классическим методам, которыми регулярно пользуются сотрудники лаборатории, относятся следующие:
- определение титра вируса по методу Рида-Менча/Спирмена-Кэрбера методом предельных серийных разведений (титр выражается в lgТЦД50), при этом учитывается цитопатическое действие вирусов на клетку,
- определение титра вируса методом бляшек или негативных колоний (титр вируса выражается бляшкообразующих единицах, БОЕ), данный метод основан на способности некоторых вирусов вызывать образование характерных зон лизиса в монослое клеток под агаризованным покрытием, которые не окрашиваются кристаллическим фиолетовым или нейтральным красным. В случае вирусов, обладающих слабо выраженным цитопатическим действием и не образующих четких негативных колоний, для детекции очагов вирусной репродукции (фокусов) используют окрашивание монослоя инфицированных клеток вирус-специфическими антителами.
Для гемагглютинирующих вирусов (например, вирусов гриппа) возможно определение титра вируса в реакции агглютинации куриных эритроцитов (1%-ная суспензия эритроцитов петуха). При этом титр вируса выражается в ГАЕ (гемагглютинирующих единицах).
Для количественного определения вирусов, у которых отсутствует цитопатическое действие, в лаборатории используют современные методы, основанные на полимеразной цепной реакции (ПЦР). В этом случае определяют число копий вирусного генома (ДНК или РНК) в единице объема. При этом используются коммерчески доступные или in-house лабораторные тест-системы.
При необходимости вирусная суспензия может быть дополнительно сконцентрирована и/или очищена от компонентов клеточного дебриса с помощью метода ультрацентрифугирования в градиенте плотности сахарозы.
Возможно проведение обучения сотрудников внешних учреждений методикам культивирования вирусов и методам определения вирусного титра на договорной основе.
